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高效液相色谱进样器的分类及使用注意事项

高效液相色谱早期使用隔膜和停流进样器，装在色谱柱入口处，现在大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求：密封性好，死体积小，重复性好，保证中心进样，进样时对色谱系统的压力、流量影响小。

高效液相色谱进样器的分类及使用注意事项

HPLC进样方式可分为：隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。

1.隔膜进样。用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内，可把样品直接送到柱头填充床的中心，死体积几乎等于零，可以获得最佳的柱效，且价格便宜，操作方便。但不能在高压下使用(如10MPA以上)；此外隔膜容易吸附样品产生记忆效应，使进样重复性只能达到1～2%；加之能碉各种溶剂的橡皮不易找到，常规分析使用受到限制。

2.停流进样。可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”夹具间距离为50mm，另一缺点是保直到将试样的热合处被破坏为止留时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中，效果较好。

3.阀进样。一般HPLC分析常用六通进样阀，其关键部件由圆形密封垫子(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积在存在，柱效率低于隔膜进样(约下降5～10%左右)，但耐高压(35～40MPA)，进样量准确，重复性好(0.5%)，操作方便。

六通阀进样方式有部分装液法和完全装液法两种。

①用部分装液法进样时，进样量应不大于定量环体积的50%(最多75%)，并要求每次进样体积准确、相同。此法进样的准确度和重复性决定免疫血清于注器取样的熟练程度，而且易产生由进样引起的峰展宽。

②用完全装液法进样时，进样量应不小于定量环体积的5～10倍（最少3倍），这样才能完全置换定量环内和流动相，消除管壁效应，确保进样的准确度花洒软管及重复电暖气性。

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六通阀使用和维护注意事项

①样品溶液进样前必须用0.45UM滤硬度计测试产品的硬度主要是为了保证所生产出来的产品质量膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。

②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。

③为防止缓冲盐和样吕残留在进样阀中镁砂，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。

4.自动进样。用于大量样品的常规分析。